Информация » Выделение мембранных белков » Определение молекулярной массы нативного белка с помощью гидродинамических методов

Определение молекулярной массы нативного белка с помощью гидродинамических методов

Применение этих методов для мембранных белков может быть сопряжено с большими трудностями, вызванными связыванием детергента.

Для нахождения молекулярной массы белка используют два метода.

1. Прямо измеряют количество связанного детергента на 1 г белка. Для этого используют спектральные методы или радиоактивно меченный детергент, а для выделения комплексов применяют различные методы, например гель-фильтрацию. Установив относительное содержание белка и детергента в комплексе, cреднее значение парциального удельного объема получают как средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента. После этого без труда находят Mк, а поскольку соотношение между белком и детергентом в комплексе известно, находят молекулярную массу белка.

2. Измеряют S0 (коэффициент седиментации) в средах с разными значениями плотности раствора ρ. Такие среды обычно получают, используя смеси Н2О и D2O. Из графика зависимости S0 от ρ находят как Mк, так и Vк (ср). При этом предполагается, что Vк - это средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента.

Vк(ср) = (Доля белка) • V(ср) белок + (Доля детергента) • V(ср) детергент.

Оценив V(ср) белок и взяв V(ср) детергент из таблицы, получают молекулярную массу белковой составляющей Mк.

Для построения графика зависимости S0 от ρ проводят аналитическое центрифугирование. Можно проводить центрифугирование и в градиенте плотности сахарозы, используя смеси Н2О и D2O, но анализ результатов в этом случае гораздо сложнее, хотя принципиально не отличается от предыдущего случая.


Похожие материалы:

Содержание химических элементов в клетке
Элементы Количество (в %) Элементы Количество (в %) Кислород 65–75 Кальций 0,04–2,00 Углерод 15–16 Магний 0,02–0,03 Водород 8–10 Натрий 0,02–0,03 Азот 1,5–3,0 Железо 0,01 ...

Железы внутренней секреции
Наряду с нервной регуляцией функций в организме человека существует гормональная регуляция с помощью биологически активных веществ – гормонов. Деятельность нервной и гормональной регуляции взаимосвязана. Гормоны в организме человека влияю ...

Классические законы Г. Менделя. Гениальное предвидение или творческая удача?
Основные законы наследуемости были описаны более века назад чешским монахом Грегором Менделем (1822-1884), преподававшим физику и естественную историю в средней школе г. Брюнна (г. Брно). Мендель занимался селекционированием гороха, и им ...