Информация » Выделение мембранных белков » Определение молекулярной массы нативного белка с помощью гидродинамических методов

Определение молекулярной массы нативного белка с помощью гидродинамических методов

Применение этих методов для мембранных белков может быть сопряжено с большими трудностями, вызванными связыванием детергента.

Для нахождения молекулярной массы белка используют два метода.

1. Прямо измеряют количество связанного детергента на 1 г белка. Для этого используют спектральные методы или радиоактивно меченный детергент, а для выделения комплексов применяют различные методы, например гель-фильтрацию. Установив относительное содержание белка и детергента в комплексе, cреднее значение парциального удельного объема получают как средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента. После этого без труда находят Mк, а поскольку соотношение между белком и детергентом в комплексе известно, находят молекулярную массу белка.

2. Измеряют S0 (коэффициент седиментации) в средах с разными значениями плотности раствора ρ. Такие среды обычно получают, используя смеси Н2О и D2O. Из графика зависимости S0 от ρ находят как Mк, так и Vк (ср). При этом предполагается, что Vк - это средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента.

Vк(ср) = (Доля белка) • V(ср) белок + (Доля детергента) • V(ср) детергент.

Оценив V(ср) белок и взяв V(ср) детергент из таблицы, получают молекулярную массу белковой составляющей Mк.

Для построения графика зависимости S0 от ρ проводят аналитическое центрифугирование. Можно проводить центрифугирование и в градиенте плотности сахарозы, используя смеси Н2О и D2O, но анализ результатов в этом случае гораздо сложнее, хотя принципиально не отличается от предыдущего случая.


Похожие материалы:

Изобразительные пособия
Обеспечить все уроки натуральными объектами не представляется возможным не только потому, что надо бережно относиться к природным ресурсам, но и в связи с тем, что не все можно принести в класс и не все можно увидеть на живых объектах. Ра ...

Производство фосфорных удобрений
Доля РФ в мировом производстве фосфорных удобрений составляет 6,5. Фосфорные удобрения в России выпускаются на 19 предприятиях, общая мощность которых составляет около 4,5 млн т, в структуре выпуска преобладают моноаммоний-фосфат и диаммо ...

Тип Бесчерепные. Ланцетники.
Строение тела у ланцетников очень простое. Если сравнивать их с другими животными, относящимися к типу хордовых, то в организме ланцетника многого можно «недосчитаться». Например, нет черепа (не случайно их выделили в тип бесчерепных), а ...