Применение этих методов для мембранных белков может быть сопряжено с большими трудностями, вызванными связыванием детергента.

Для нахождения молекулярной массы белка используют два метода.

1. Прямо измеряют количество связанного детергента на 1 г белка. Для этого используют спектральные методы или радиоактивно меченный детергент, а для выделения комплексов применяют различные методы, например гель-фильтрацию. Установив относительное содержание белка и детергента в комплексе, cреднее значение парциального удельного объема получают как средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента. После этого без труда находят Mк, а поскольку соотношение между белком и детергентом в комплексе известно, находят молекулярную массу белка.

2. Измеряют S0 (коэффициент седиментации) в средах с разными значениями плотности раствора ρ. Такие среды обычно получают, используя смеси Н2О и D2O. Из графика зависимости S0 от ρ находят как Mк, так и Vк (ср). При этом предполагается, что Vк - это средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента.

Vк(ср) = (Доля белка) • V(ср) белок + (Доля детергента) • V(ср) детергент.

Оценив V(ср) белок и взяв V(ср) детергент из таблицы, получают молекулярную массу белковой составляющей Mк.

Для построения графика зависимости S0 от ρ проводят аналитическое центрифугирование. Можно проводить центрифугирование и в градиенте плотности сахарозы, используя смеси Н2О и D2O, но анализ результатов в этом случае гораздо сложнее, хотя принципиально не отличается от предыдущего случая.

Похожие материалы:

Биология и поведение
Живет в норах с подводным входом. Вход в нору обычно круглый, диаметром 12-15 см (реже до 30). Два-три коридора поднимаются от входа к гнездовым камерам, расположенным на разной глубине (самая верхняя обычно под самой поверхностью земли, ...

Как определить, пустой ли чехол у LС
Огромная Cattleya выпустила два чехла, внутри ничего не видно. Как определить, пустые ли чехлы? Что им теперь нужно? Досвечивать? Вот, например, маленькая, привезенная из тропиков, Cattleya тоже с чехлом. Но видно, что внутри что-то есть ...

Основные положения процесса экспрессии генов
Экспрессия генов – это процесс реализации информации, закодированной в структуре ДНК, на уровне РНК и белков. Прежде чем переходить к детальному описанию и анализу этих процессов, мы вкратце рассмотрим суть экспрессии генов – ее механизм ...