Информация » Выделение мембранных белков » Определение молекулярной массы нативного белка с помощью гидродинамических методов

Определение молекулярной массы нативного белка с помощью гидродинамических методов

Применение этих методов для мембранных белков может быть сопряжено с большими трудностями, вызванными связыванием детергента.

Для нахождения молекулярной массы белка используют два метода.

1. Прямо измеряют количество связанного детергента на 1 г белка. Для этого используют спектральные методы или радиоактивно меченный детергент, а для выделения комплексов применяют различные методы, например гель-фильтрацию. Установив относительное содержание белка и детергента в комплексе, cреднее значение парциального удельного объема получают как средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента. После этого без труда находят Mк, а поскольку соотношение между белком и детергентом в комплексе известно, находят молекулярную массу белка.

2. Измеряют S0 (коэффициент седиментации) в средах с разными значениями плотности раствора ρ. Такие среды обычно получают, используя смеси Н2О и D2O. Из графика зависимости S0 от ρ находят как Mк, так и Vк (ср). При этом предполагается, что Vк - это средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента.

Vк(ср) = (Доля белка) • V(ср) белок + (Доля детергента) • V(ср) детергент.

Оценив V(ср) белок и взяв V(ср) детергент из таблицы, получают молекулярную массу белковой составляющей Mк.

Для построения графика зависимости S0 от ρ проводят аналитическое центрифугирование. Можно проводить центрифугирование и в градиенте плотности сахарозы, используя смеси Н2О и D2O, но анализ результатов в этом случае гораздо сложнее, хотя принципиально не отличается от предыдущего случая.


Похожие материалы:

Витамин В3
Ø Химическое название: пантотеновая кислота. Витамин хорошо растворим в воде, устойчив к свету, кислороду, стабилен в нейтральном растворе. Ø Роль в организме: входит в состав важнейшего кофермента – коэнзима А. Витамин рег ...

Соль поваренная таблетированная
Соль поваренная таблетированная используется в системах смягчения воды для восстановления рабочих характеристик ионообменных смол. Необходимый солевой раствор автоматически приготовляется в отдельной емкости, где концентрированная соль в ...

Средства индивидуальной защиты
При химическом и бактериологическом заражении местности, к средствам индивидуальной защиты относятся: средства индивидуальной защиты органов дыхания (респиратор Р-2, противогаз ГП-5, противопыльная тканевая маска ПТМ – 1, ватно – марлевая ...