Информация » Выделение мембранных белков » Метод радиационной инактивации

Метод радиационной инактивации

Метод радиационной инактивации для определения размера мишени все чаще применяется при исследовании мембранных белков. Изучать можно как очищенные белки, так и неочищенные препараты, в том числе интактные биомембраны. Суть метода состоит в определении доли белковых молекул, получающих повреждения при облучении. Для этого используют ферментативные методы связывания гормонов или других лигандов или спектральные методы. Процедура состоит в следующем. Образец, обычно замороженный, подвергают высокоэнергетическому облучению (например, облучают пучком электронов из синхротрона). Через разные промежутки времени отбирают пробы, размораживают их и проводят измерения. Повреждения белка под действием излучения (в частности, разрыв ковалентных связей) выявляют, например, с помощью электрофореза в ПААГ с ДСН. Как показывает опыт, некоторые субъединицы полностью утрачивают биологическую активность при внесении радиационного повреждения в любое место полипептидной цепи. Ключевым моментом является то, что, чем крупнее белковая молекула, тем больше вероятность ее повреждения и, следовательно вероятность инактивации. Эта вероятность зависит не от формы молекулы, а от ее массы. Обычно для того, чтобы облегчить интерпретацию результатов, параллельно облучают белок с известной молекулярной массой. Если исследуемый белок содержит более одной субъединицы, возникают определенные трудности при анализе результатов.


Похожие материалы:

Часто задаваемые вопросы: Цветение каттлей. Цветение и период покоя
2 месяца назад была куплена каттлея Дизу. Сначала лист быстро рос, потом пошел корневой рост, стала надуваться бульба. Доросла до половины и встала. Если посмотреть на просвет, то через оберточку виден чехольчик. Не знаю что делать: огран ...

Лабораторные работы in vitro
Быстрое развитие и подъем технологии in vitro в исследованиях и тестировании нуждается в поддержке путем ознакомления студентов высших учебных заведений с этой техникой. Скорее практические работы in vitro (эксперименты на культуре клеток ...

Высшая нервная деятельность
Особый раздел физиологии изучает материальные основы психической деятельности человека. Он появился благодаря работам И.П. Павлова, создавшего учение о безусловных и условных рефлексах как двух различных формах поведения человека. Безусл ...