Метод радиационной инактивации для определения размера мишени все чаще применяется при исследовании мембранных белков. Изучать можно как очищенные белки, так и неочищенные препараты, в том числе интактные биомембраны. Суть метода состоит в определении доли белковых молекул, получающих повреждения при облучении. Для этого используют ферментативные методы связывания гормонов или других лигандов или спектральные методы. Процедура состоит в следующем. Образец, обычно замороженный, подвергают высокоэнергетическому облучению (например, облучают пучком электронов из синхротрона). Через разные промежутки времени отбирают пробы, размораживают их и проводят измерения. Повреждения белка под действием излучения (в частности, разрыв ковалентных связей) выявляют, например, с помощью электрофореза в ПААГ с ДСН. Как показывает опыт, некоторые субъединицы полностью утрачивают биологическую активность при внесении радиационного повреждения в любое место полипептидной цепи. Ключевым моментом является то, что, чем крупнее белковая молекула, тем больше вероятность ее повреждения и, следовательно вероятность инактивации. Эта вероятность зависит не от формы молекулы, а от ее массы. Обычно для того, чтобы облегчить интерпретацию результатов, параллельно облучают белок с известной молекулярной массой. Если исследуемый белок содержит более одной субъединицы, возникают определенные трудности при анализе результатов.

Похожие материалы:

Витамин Н
Ø Химическое название: биотин. Устойчив к нагреванию, кислороду и действию щелочей и кислот. Ø Роль в организме: Биотин содержит необходимое количество витаминов и микроэлементов, которые обеспечивают здоровую структуру ног ...

Круглоротые (миноги и миксины).
Класс круглоротых – очень древняя группа позвоночных, возникшая более 400 млн. лет назад. Когда-то круглоротые были многочисленны и разнообразны. Но до нашего времени дожило только около 50 видов миног и миксин. Миксины – очень необычны ...

Построение новой клеточной оболочки
Необходимо различать пролиферацию цитоплазматической мембраны и клеточной стенки и сегрегацию поверхностных структур. При изучении пролиферации используют, как правило, синхронные культуры микроорганизмов и изучают включение меченных рад ...