Метод радиационной инактивации для определения размера мишени все чаще применяется при исследовании мембранных белков. Изучать можно как очищенные белки, так и неочищенные препараты, в том числе интактные биомембраны. Суть метода состоит в определении доли белковых молекул, получающих повреждения при облучении. Для этого используют ферментативные методы связывания гормонов или других лигандов или спектральные методы. Процедура состоит в следующем. Образец, обычно замороженный, подвергают высокоэнергетическому облучению (например, облучают пучком электронов из синхротрона). Через разные промежутки времени отбирают пробы, размораживают их и проводят измерения. Повреждения белка под действием излучения (в частности, разрыв ковалентных связей) выявляют, например, с помощью электрофореза в ПААГ с ДСН. Как показывает опыт, некоторые субъединицы полностью утрачивают биологическую активность при внесении радиационного повреждения в любое место полипептидной цепи. Ключевым моментом является то, что, чем крупнее белковая молекула, тем больше вероятность ее повреждения и, следовательно вероятность инактивации. Эта вероятность зависит не от формы молекулы, а от ее массы. Обычно для того, чтобы облегчить интерпретацию результатов, параллельно облучают белок с известной молекулярной массой. Если исследуемый белок содержит более одной субъединицы, возникают определенные трудности при анализе результатов.

Похожие материалы:

Орхидариум: личный опыт. Не повторяйте моих ошибок
Почти два года тому назад я загорелась идеей построить в отдельно взятой квартире рай для орхидей. Попробую внятно изложить, как это было и что получилось в итоге. По объявлению в Интернете был найден человек, который согласился воплоти ...

Общая характеристика нервная ткани
Нервной ткани входят два вида клеток: нервные клетки, или нейроны (нейроциты), и глиальные клетки, или глиоциты. Первым присуща функция возбуждения и проведения нёрвного импульса, а вторым - опорная, трофическая, изоляционная и защитная ф ...

Биология и поведение
Живет в норах с подводным входом. Вход в нору обычно круглый, диаметром 12-15 см (реже до 30). Два-три коридора поднимаются от входа к гнездовым камерам, расположенным на разной глубине (самая верхняя обычно под самой поверхностью земли, ...