Информация » Выделение мембранных белков » Метод радиационной инактивации

Метод радиационной инактивации

Метод радиационной инактивации для определения размера мишени все чаще применяется при исследовании мембранных белков. Изучать можно как очищенные белки, так и неочищенные препараты, в том числе интактные биомембраны. Суть метода состоит в определении доли белковых молекул, получающих повреждения при облучении. Для этого используют ферментативные методы связывания гормонов или других лигандов или спектральные методы. Процедура состоит в следующем. Образец, обычно замороженный, подвергают высокоэнергетическому облучению (например, облучают пучком электронов из синхротрона). Через разные промежутки времени отбирают пробы, размораживают их и проводят измерения. Повреждения белка под действием излучения (в частности, разрыв ковалентных связей) выявляют, например, с помощью электрофореза в ПААГ с ДСН. Как показывает опыт, некоторые субъединицы полностью утрачивают биологическую активность при внесении радиационного повреждения в любое место полипептидной цепи. Ключевым моментом является то, что, чем крупнее белковая молекула, тем больше вероятность ее повреждения и, следовательно вероятность инактивации. Эта вероятность зависит не от формы молекулы, а от ее массы. Обычно для того, чтобы облегчить интерпретацию результатов, параллельно облучают белок с известной молекулярной массой. Если исследуемый белок содержит более одной субъединицы, возникают определенные трудности при анализе результатов.


Похожие материалы:

Гормоны передней доли гипофиза
Тропные: Тиреотропный гормон (тиреотропин) стимулирует функцию щитовидной железы. Если удалить или разрушить гипофиз у животных, то наступает атрофия щитовидной железы, а введение тиреотропина восстанавливает ее функции. Адренокортикотр ...

Володушка серповидная - Bupleurum falkatum L [ B rassicum (K. – Pd.) Woronov]
Статус. 1 (Е) – вид, находящийся под угрозой уничтожения. Для Пензенской области указывается как очень редкий вид (Солянов, 2001). Общее распространение. Средняя и Восточная Европа, Кавказ (Предкавказье), Средиземноморье (Балканы), Малая ...

Пищеварительная система
Пищеварительная система человека состоит из пищеварительной трубки (длиной 8–9 м) и тесно связанных с нею крупных пищеварительных желез – печени, поджелудочной железы, слюнных желез (крупных и мелких). Пищеварительная система начинается п ...