Метод радиационной инактивации для определения размера мишени все чаще применяется при исследовании мембранных белков. Изучать можно как очищенные белки, так и неочищенные препараты, в том числе интактные биомембраны. Суть метода состоит в определении доли белковых молекул, получающих повреждения при облучении. Для этого используют ферментативные методы связывания гормонов или других лигандов или спектральные методы. Процедура состоит в следующем. Образец, обычно замороженный, подвергают высокоэнергетическому облучению (например, облучают пучком электронов из синхротрона). Через разные промежутки времени отбирают пробы, размораживают их и проводят измерения. Повреждения белка под действием излучения (в частности, разрыв ковалентных связей) выявляют, например, с помощью электрофореза в ПААГ с ДСН. Как показывает опыт, некоторые субъединицы полностью утрачивают биологическую активность при внесении радиационного повреждения в любое место полипептидной цепи. Ключевым моментом является то, что, чем крупнее белковая молекула, тем больше вероятность ее повреждения и, следовательно вероятность инактивации. Эта вероятность зависит не от формы молекулы, а от ее массы. Обычно для того, чтобы облегчить интерпретацию результатов, параллельно облучают белок с известной молекулярной массой. Если исследуемый белок содержит более одной субъединицы, возникают определенные трудности при анализе результатов.

Похожие материалы:

Организация рецептивных полей ганглиозных клеток
При регистрации сигналов от одной ганглиозной клетки прежде всего важно найти границы ее рецептивного поля. Характерной особенностью большинства ганглиозных клеток и нейронов зрительной системы является то, что они периодически дают редки ...

Замерли бутоны в чехле Cattleya
На каттлее, в чехле, замерли уже начавшие развиваться маленькие (1 мм) бутоны. Эту каттлею в феврале я привезла из Тайланда, сорт не знаю, однолистная, цвела в феврале. В середине лета наросла новая бульба, сразу с чехлом. Недели 2-3 наза ...

Витамин В2
Ø Химическое название: рибофлавин. В чистом виде рибофловин представляет собой оранжево-желтый порошок, трудно растворимый в воде, легко разрушающийся на свету. Рибофлавин очень чувствителен к воздействию ультрафиолетовых лучей, по ...