Информация » Выделение мембранных белков » Определение ферментативной активности

Определение ферментативной активности

Одним из наиболее важных методов характеристики очищенных мембранных белков несомненно является определение биохимической активности. При этом используются в основном такие же критерии, как и для растворимых белков, но могут возникать и свои трудности. Первая из них связана с тем, что биохимическая активность мембранных белков часто очень сильно зависит от связывания с белком липидов и детергентов. Потеря активности может быть как обратимой, так и необратимой. Целесообразно иметь какую-то оценку удельной активности исследуемого белка in vivo или в составе мембран до солюбилизации. Избыток детергента может оказывать ингибирующий эффект, например за счет разбавления неполярных субстратов в популяции мицелл и уменьшения ферментативной активности. Измеряя активность любого мембранного белка, необходимо иметь в виду, что in situ он находится в окружении липидов, обеспечивающих оптимальную активность. Вторая проблема связана с белками, обладающими "трансбислойной" активностью; примерами могут служить белки, образующие каналы, и транспортные белки. В этих случаях необходимо учитывать перемещение растворенных веществ из одного компартмента в другой (например, внутрь липосом и наружу).


Похожие материалы:

Влажность воздуха
Влажность должна находиться в пределах 50-80%, причём особенно важно, чтобы она была высока ночью, когда растения дышат. Повысить влажность вокруг растений можно, поставив горшки в сосуд с водой. Позаботьтесь однако, чтобы горшки и вода н ...

Функции и строение кожи
Известно, что кожа-это не оболочка тела, а многофункциональный орган, который выполняет дыхательную, питательную, выделительную и защитную функции. Кожа является также органом иммуногенеза. Протекающие в коже биохимические реакции обеспеч ...

Об одном орхидном мифе
Многие слышали историю о том, что Cattleya labiata была обнаружен случайно, когда прибыла в Англию в виде упаковочного материала для некоторых папоротников. Вильям Каттлей (с которого история началась) выбросил упаковочный материал под ла ...