Информация » Выделение мембранных белков » Определение ферментативной активности

Определение ферментативной активности

Одним из наиболее важных методов характеристики очищенных мембранных белков несомненно является определение биохимической активности. При этом используются в основном такие же критерии, как и для растворимых белков, но могут возникать и свои трудности. Первая из них связана с тем, что биохимическая активность мембранных белков часто очень сильно зависит от связывания с белком липидов и детергентов. Потеря активности может быть как обратимой, так и необратимой. Целесообразно иметь какую-то оценку удельной активности исследуемого белка in vivo или в составе мембран до солюбилизации. Избыток детергента может оказывать ингибирующий эффект, например за счет разбавления неполярных субстратов в популяции мицелл и уменьшения ферментативной активности. Измеряя активность любого мембранного белка, необходимо иметь в виду, что in situ он находится в окружении липидов, обеспечивающих оптимальную активность. Вторая проблема связана с белками, обладающими "трансбислойной" активностью; примерами могут служить белки, образующие каналы, и транспортные белки. В этих случаях необходимо учитывать перемещение растворенных веществ из одного компартмента в другой (например, внутрь липосом и наружу).


Похожие материалы:

Типы охотничьих угодий
Лесные площади занимают примерно 66,25% территорий, в основном лесной массив располагается на севере района и на юге западе. Основную кормовую базу представляют дубово-бело-березовые, дубово-черно-березовые, чистые насаждения дуба монголь ...

Лопатка
Лопатка – парная, плоская кость в виде треугольника, вершина направлена краниовентрально, а основание каудодорсально. На ней различают латеральную и медиальную (реберную) поверхность, краниальный и каудальный края, краниальный, каудальный ...

Эпидермис
Эпидермис представляет собой эпителиальную ткань эктодермического происхождения, состоящую из 4-х слоев кератиноцитов. ...