Информация » Выделение мембранных белков » Определение ферментативной активности

Определение ферментативной активности

Одним из наиболее важных методов характеристики очищенных мембранных белков несомненно является определение биохимической активности. При этом используются в основном такие же критерии, как и для растворимых белков, но могут возникать и свои трудности. Первая из них связана с тем, что биохимическая активность мембранных белков часто очень сильно зависит от связывания с белком липидов и детергентов. Потеря активности может быть как обратимой, так и необратимой. Целесообразно иметь какую-то оценку удельной активности исследуемого белка in vivo или в составе мембран до солюбилизации. Избыток детергента может оказывать ингибирующий эффект, например за счет разбавления неполярных субстратов в популяции мицелл и уменьшения ферментативной активности. Измеряя активность любого мембранного белка, необходимо иметь в виду, что in situ он находится в окружении липидов, обеспечивающих оптимальную активность. Вторая проблема связана с белками, обладающими "трансбислойной" активностью; примерами могут служить белки, образующие каналы, и транспортные белки. В этих случаях необходимо учитывать перемещение растворенных веществ из одного компартмента в другой (например, внутрь липосом и наружу).


Похожие материалы:

Новая гипотеза об особой роли малых молекул в первичном зарождении белково-нуклеиновых систем
На очередном совещании по философским вопросам совре­менной медицины в Президиуме Российской академии медицинских наук исследователи А.В. Олескин, И.В. Ботвинко и Т.А. Кировская сообщили следующее: «В последние десятиле­тия накапливаютс ...

Функциональное значение ядер гипоталамуса
В передне-боковой части гипоталамуса различают переднюю и среднюю группы гипоталамических ядер (рис.4). Рисунок 4. Топография ядер гипоталамуса К передней группе относятся супрахиазматические ядра, преоптическое ядро, и самые крупные ...

Рост и развитие
Медвежата родятся беспомощными, слепыми и глухими, покрытыми редкой короткой шерстью (длиной до 5-6 мм), через которую просвечивает розовая кожа. Следы пигментации заметны у них лишь на крыльях носа; подошвы лап розовые. Когти новорожденн ...