Информация » Выделение мембранных белков » Определение ферментативной активности

Определение ферментативной активности

Одним из наиболее важных методов характеристики очищенных мембранных белков несомненно является определение биохимической активности. При этом используются в основном такие же критерии, как и для растворимых белков, но могут возникать и свои трудности. Первая из них связана с тем, что биохимическая активность мембранных белков часто очень сильно зависит от связывания с белком липидов и детергентов. Потеря активности может быть как обратимой, так и необратимой. Целесообразно иметь какую-то оценку удельной активности исследуемого белка in vivo или в составе мембран до солюбилизации. Избыток детергента может оказывать ингибирующий эффект, например за счет разбавления неполярных субстратов в популяции мицелл и уменьшения ферментативной активности. Измеряя активность любого мембранного белка, необходимо иметь в виду, что in situ он находится в окружении липидов, обеспечивающих оптимальную активность. Вторая проблема связана с белками, обладающими "трансбислойной" активностью; примерами могут служить белки, образующие каналы, и транспортные белки. В этих случаях необходимо учитывать перемещение растворенных веществ из одного компартмента в другой (например, внутрь липосом и наружу).


Похожие материалы:

Опавшие листья
Если вы собираете мох поздней осенью не стоит полностью очищать его от опавшей листвы — медленно разлагаясь она послужит прекрасным естественным источником питания для вашей орхидеи. Многие хвалят листья дуба но, если у вас есть возможнос ...

Фотосинтез.
Это процесс преобразования энергии света в энергию химических связей органических веществ. Процесс фотосинтеза обычно описывают уравнением: Такое преобразование происходит в хлоропластах, где имеются молекулы хлорофиллов, поглощающих с ...

Освещение
Обеспечить необходимую освещенность для фаленопсиса достаточно просто. Чтобы найти лучшее место давайте вспомним что эпифиты растут на деревьях и солнечные лучи попадают на них только сквозь листву деревьев. Они с удовольствием будут раст ...