Информация » Выделение мембранных белков » Определение ферментативной активности

Определение ферментативной активности

Одним из наиболее важных методов характеристики очищенных мембранных белков несомненно является определение биохимической активности. При этом используются в основном такие же критерии, как и для растворимых белков, но могут возникать и свои трудности. Первая из них связана с тем, что биохимическая активность мембранных белков часто очень сильно зависит от связывания с белком липидов и детергентов. Потеря активности может быть как обратимой, так и необратимой. Целесообразно иметь какую-то оценку удельной активности исследуемого белка in vivo или в составе мембран до солюбилизации. Избыток детергента может оказывать ингибирующий эффект, например за счет разбавления неполярных субстратов в популяции мицелл и уменьшения ферментативной активности. Измеряя активность любого мембранного белка, необходимо иметь в виду, что in situ он находится в окружении липидов, обеспечивающих оптимальную активность. Вторая проблема связана с белками, обладающими "трансбислойной" активностью; примерами могут служить белки, образующие каналы, и транспортные белки. В этих случаях необходимо учитывать перемещение растворенных веществ из одного компартмента в другой (например, внутрь липосом и наружу).


Похожие материалы:

Вероятность сохранения новой мутации
Каждый отдельный мутантный аллель при своем первом возникновении бывает редок. Насколько вероятно, что он сохранится в родительской популяции? Мы знаем, что частота нового мутантного аллеля, нe может увеличиваться за счет одного лишь проц ...

Часто задаваемые вопросы: Фаленопсис. Проблемы
1. Засыхают самые маленькие бутоны у новоприобретенного цветущего фаленопсиса. Ответ: Если уже раскрытые цветы не вянут одновременно с опаданием бутонов, то, скорее всего, это реакция на смену условий содержания. Не повод для паники. 2 ...

Выводы
1. Обработка пятнистой оранжерейной тли препаратами 729, П-55. 925 в 0,1% - ной концентрации не только не снижает численность вредителя, но напротив, стимулирует скорость роста популяции тли. 2. Обработка пятнистой оранжерейной тли препа ...