Информация » Выделение мембранных белков » Изучение трехмерной структуры с помощью рентгеновской дифракции и реконструкции изображения. Кристаллизация мембранных белков

Изучение трехмерной структуры с помощью рентгеновской дифракции и реконструкции изображения. Кристаллизация мембранных белков

Наиболее детальную структурную информацию об очищенных мембранных белках можно получить, исследуя методом рентгеновской дифракции трехмерные белковые кристаллы. К сожалению, оказалось, что интегральные мембранные белки очень трудно кристаллизовать. Будучи удалены из своего естественного липидного окружения, неполярные участки липидных молекул склонны агрегировать с образованием неупорядоченных форм, непригодных для кристаллографического анализа. Ясно, что необходимы специальные методы, позволяющие обойти эти трудности, и в этом был достигнут определенный прогресс. Михель обратил внимание, что мембранные белки образуют кристаллы двух типов (рис.2).

Кристаллы типа I напоминают стопки мембран. В них осуществляется латеральное взаимодействие между неполярными участками, а мембраноподобные слои связывают полярные участки белков. Подобные кристаллы были получены для нескольких белков, но ни в одном случае их нельзя было исследовать с помощью дифракции с высоким разрешением. Кристаллы типа II стабилизируются за счет контактирования полярных участков белковых молекул, а небольшие амфифильные соединения или детергенты в основном заполняют промежутки между ними. Заметим, что очень важными являются размер, заряд и другие свойства детергентов; если эти параметры неблагоприятны, то детергент может дестабилизировать кристаллическую структуру. Кристаллы типа II образуют белки фотосинтетического реакционного центра Rhodopseudomonas viridis

Рис.2. Два основных типа кристаллов мембранных белков.

Кристаллы типа I представляют собой двумерные стопки, упорядоченно расположенные в третьем измерении. В кристаллах типа II с гидрофобными поверхностями белков связаны молекулы детергента. Пунктиром отмечены гидрофильные домены белков.

Итак, мембранные белки можно кристаллизовать, и хотя число успешных попыток пока невелико, можно сделать несколько выводов, касающихся методологии кристаллизации.

1. Белки кристаллизуются вместе с детергентом.

2. Очень важен выбор детергента. По-видимому, наиболее пригодны цвиттерионные или неионные детергенты с высокой ККМ и малым размером мицелл

3. Кристаллизация облегчается в присутствии малых амфифильных органических молекул, по-видимому, влияющих на полярные концевые группы детергента.

4. Полиэтиленгликоль и сульфат аммония, обычно использующиеся при кристаллизации растворимых белков, применяются и для индукции кристаллизации мембранных белков.


Похожие материалы:

Принципы автоэволюционизма
Автоэволюционизм — это такой подход, который пытается осветить процесс автоэволюции, т.е. эволюции, внутренне присущей веществу и энергии. 1. Эволюция — процесс, проистекающий из организации вещества в энергии. Автоэволюция — это облигат ...

Выводы
Палочки и колбочки способны реагировать на освещение ярким и слабым светом. Зрительные пигменты плотно упакованы в мембранах палочек и колбочек. Передача сигнала происходит в несколько этапов, с участием G-белка и иГМФ. В темноте фотор ...

Механизмы клеточной проницаемости
Следует различать пассивное проникновение веществ через мембрану без участия посредников и активное проникновение веществ через мембрану с участием посредников - собственно транспорт. Пассивная проницаемость мембраны - это проникновение ...