Определение общей численности бактерий в почве

Общее количество бактерий в почве учитывали прямым счетом на фиксированных окрашенных мазках (метод Виноградского-Брида) [6;7].

1. Пять предметных стекол обезжиривали и на каждом обводили карандашом по стеклу квадрат со стороной 15 мм.

2. Бактериальную суспензию объемом 0,1 мл из соответствующей колбы наносили на стекло и равномерно распределяли по площади квадрата.

3. Препараты подсушивали на воздухе, фиксировали в пламени спиртовки (проносили над пламенем 2 – 3 раза) и окрашивали 2 минуты фуксином. Краситель сливали, препарат промывали и высушивали между полосками фильтровальной бумаги.

4. Подсчитывали количество клеток, используя световой микроскоп марки «Биолам» с масляной иммерсионной системой при увеличении 10×1,0×100.

Для прямого счета микробных клеток вставляли в окуляр микроскопа сеточку Гаженко, 9 маленьких квадратиков которой составляют поле зрения. Просматривали 15 полей зрения.

Общую численность бактерий в 1 г почвы (Nобщ.) определяли по формуле:

S × Σni

N общ. = z× s×v ×100 [кл/г], где

S – общая площадь окрашенного на стекле препарата (225 мм2);

Σni – сумма подсчитанных под микроскопом микробных клеток;

z – количество просмотренных полей зрения (15);

s – площадь одного поля зрения (1089×10-6 мм2);

v – объем образца воды, затраченный на приготовление окрашенного препарата (0,1 мл);

100 – разведение первоначального образца почвы в 100 раз.

Опыт проводили в двухкратной повторности, чтобы рассчитать доверительный интервал.


Похожие материалы:

Сожительство бобра на почве пищевых и пространственных связей
Существуют различные формы сожительства животных на почве пищевых и пространственных связей. В жилище бобра, например, в Воронежском заповеднике обнаружено 17 видов позвоночных сожителей и 32 вида беспозвоночных. Имеет место квартиранство ...

Органная специфичность метилирования и экспрессии промотора гена пататина
Промотор гена пататина класса I – это тканеспецифичный промотор, обеспечивающий экспрессию гена главным образом в клубнях. Ранее было показано, что невысокий уровень экспрессии обнаруживается и в других органах картофеля. Проведенный нами ...

Химический состав живого вещества как следствие избирательного перемещения веществ в биологическом круговороте
Средний состав живого вещества заметно отличается от состава земной коры (табл. 1). В земной коре преобладают кислород, кремний, алюминий, железо. В живых организмах преобладают – углерод, водород, кислород, азот, кальций, фосфор. Локальн ...