Определение количества клеток сапротрофов (Nсапр.) проводили высевом на жидкую питательную среду – мясо-пептонный бульон (МПБ) [6]. Для приготовления МПБ использовали стандартную питательную среду (ИЛО «Питательные среды»). Состав МПБ, г/л: панкреатический гидролизат кильки – 17,9; NaCl – 7,7 ± 0,3; вода дистиллированная – 1000 мл. Среду стерилизовали автоклавированием 20 мин при 1 атм. Численность определяли при помощи метода наиболее вероятного числа (НВЧ) с использованием таблиц Мак-Креди [7].

Готовили

ряд предельных десятикратных разведений 1 г почвы. Для посевов использовали разведения от 10-1 до 10-7. Количество посевного материала везде составляло 1 мл, посев осуществляли в трехкратной повторности. Инкубацию проводили в термостате при 28 0С в течение 7 сут. После инкубации регистрировали рост бактерий, используя различные показатели: помутнение среды, образование пленки [6;7].

Для выделения олиготрофов использовали среду М2 следующего состава [11]: Na2HPO4 – 0,8 г; KH2PO4 – 0,5 г; NH4Cl – 0,5 г; MgSO4 – 0,2 г; CaCl2 – 0,1 г; FeSO4×7H2O –15 мг; дрожжевой экстракт – 0,1 г ; пептон – 0,2 г; агар – 15 г; глюкоза – 0,2 г; вода дистиллированная – 1000 мл. Среду стерилизовали автоклавированием 20 мин при 1 атм. Численность олиготрофов (Nолиг.) определяли методом высева по Коху [7]. Готовили ряд предельных десятикратных разведений 1 г почвы в дистиллированной воде: от 10-1 до 10-9.

По 1 мл суспензии из каждого разведения вносили в три параллельные чашки Петри. Все чашки заливали расплавленной средой. Посевы инкубировали 14 сут., а затем подсчитывали количество колоний, выросших на каждой чашке и среднее число колоний, выросших из одного разведения. При этом определяли значимость различий двух повторных определений по критерию χ2, рассчитываемому по формуле [7]:

(ni – n)2

χ 2 = п ,

где пi – число колоний, выросших на первой и второй чашках, засеянных из одного разведения; п – их среднее значение.

Различие считается значимым при χ 2 не менее 3,841. Пересчет числа выросших колоний (п) на численность бактерий соответствующей группы (N) производили исходя из предположения, что одной колониеобразующей единицей (КОЕ) является отдельная микробная клетка. Для этого использовали формулу:

n×r

Nолиг. = v [кл/г],

где п – среднее число колоний на чашках Петри, засеянных из одного разведения; r – величина разведения; v – объем образца, посеянного на чашку (мл).

Кроме того, рассчитывали отношение Nсапр. к Nобщ. для каждого горизонта.

Похожие материалы:

Особенности транскрипции генов оперонов
С помощью метода run on транскрипции была изучена интенсивность транскрипции нескольких оперонов пластома ячменя. Основой транскрипционной системы служили лизированные хлоропласты, которые были выделены из первых листьев ячменя разного во ...

Виды альтернатив, используемых в высшем образовании.
Подсчитано, что в высшем образовании по всей Европе ежегодно используется несколько сотен тысяч позвоночных животных или 1% от общего числа задействованных в науке видов животных. Однако это число, скорее всего, занижено т.к. процедуры р ...

Ход пересадки
Очень часто можно обнаружить орхидеи, в том числе и цимбидиумы, в цветочных магазинах или в «уценке». Магазинные растения, тем более, приобретённые в «уценке», зачастую успевают до покупки пострадать от перелива, переохлаждения и недостат ...