Нами разработан экспериментальный метод селекции, идентификации и картирования потенциальных энхансерных элементов внутри длинных геномных последовательностей. Предложенный метод позволяет проводить одновременный поиск всех элементов, проявляющих энхансерную активность, среди множества коротких фрагментов ДНК, перекрывающих исследуемую область генома.

Используемый в работе подход основан на способности энхансеров активировать промотор репортерного гена. Набор коротких фрагментов ДНК, полученных расщеплением участка длинной 1 млн. п.н. хромосомы 19 человека, был клонирован в специально сконструированный нами самоинактивирующийся ретровирусный вектор, содержащий репортерный ген неомицин-фосфотрансферазы II под контролем минимального промотора цитомегаловируса.

В дальнейшем был получен пул ретровирусных частиц, которыми инфицировали клетки линии HeLa, после чего, были отобраны неомицин-устойчивые клоны, содержащие интегрированные в геном конструкции с фрагментами ДНК, обладающими активностью энхансеров. ДНК неомицин-устойчивых клонов использовали для амплификации соответствующих фрагментов, которые затем клонировали в плазмидный вектор. Таким образом, была получена библиотека потенциальных энхансеров. Клоны библиотеки секвенировали и была построена карта расположения энхансеров в интересующем нас локусе хромосомы 19 человека. Анализ библиотеки выявил 15 энхансер-подобных последовательностей в полигенном локусе хромосомы 19 человека длинной 1 млн. п.н., энхансерная активность 13 из них была подтверждена в экспериментах по транзиентным трансфекциям с помощью системы двойной люциферазной детекции. Найденные последовательности преимущественно расположены в 5′ прилегающих к генам областях либо внутри интронов.

Похожие материалы:

Ревень тангутский (Rheum palmatum)
Многолетнее мощное травянистое растение с многоглавым темно-бурым коротким корневищем и крупным мясистыми корнями, семейства гречишных. Стебли прямые, маловетвистые, 1-3м высоты, 4-5см в диаметре, несущие по несколько мелких черешков, яй ...

Болезни и вредители
Большинство болезней вызывается нарушением температурного режима или режима полива. Избыточный полив при высокой или низкой температуре приводит к развитию грибковых заболеваний, таких как гниль, что легко может привести к гибели всего ра ...

Конспект урока: "Систематика растений"
Цели: Помочь учащимся самостоятельно разобраться с делением растений на группы и их классификацией. Задачи: Образовательные: · помочь учащимся узнать, какие систематические группы бывают у растений, и как они связаны друг с другом. ...